홍삼 추출물의 다양한 활용
추출 법에 따른 80 % 에탄올 홍삼 추출물을 처리하였을 때 Raw 264.7 대식 세포의 생존율은 같다. 홍삼 추출물을 처리하지 않은 대조군의 세포 생존율을 100 %로 기준 하였을 때, 50 μg/mL 초음파 추출물을 제외한 50 ~ 400 μg/mL 농도의 모든 홍삼 추출물 실험 군들이 대조군에 비하여 유의 적으로 높은 생존율을 보였다. 가장 높은 생존율은 400 μg/mL 교반 추출물(201.02 %)이었으며, 같은 농도의 초음파 추출물 188.35 %의 생존률과 유의적 차이(p<0.05)를 보였다. 농도 의존적으로 홍삼 추출물의 농도가 높을수록 생존율도 높아지는 것으로 보아 홍삼 추출물은 면역 세포 증식을 도와주는 기능이 있음을 유추할 수 있다. 50 μg/mL와 400 μg/mL 농도에서 교반법에 의한 추출물이 초음파에 의한 추출물보다 세포 생존율이 유의 적으로 높았으며, 반면에 200 μg/mL 농도에서 초음파에 의한 추출물이 교반 법에 의한 추출물보다 세포 생존율이 유의 적으로 높았다(p<0.05).일반적으로 세포 생존율이 85 % 이상일 경우 세포 독성을 보이지 않는다고 알려져 있으므로, 본 연구 결과에서 800 μg/mL 농도의 교반 추출물과 초음파 추출물 모두 면역 세포의 생존율이 50 % 미만인 점을 보아 800 μg/mL 농도의 홍삼 추출물은 세포 독성을 보이는 것으로 사료 된다. 기존 연구에서 감압 농축 방법을 이용하여 추출된 홍삼, 백삼, 흑삼 추출물의 세포 생존율은 1, 10,μg/mL 농도에서 세포 독성이 없는 것으로 확인되었으며 , 본 연구에서는 홍삼 추출물을 100 ~ 800 μg/mL의 농도로 면역 세포에 처리하였을 때, 교반 추출 법과 초음파 추출법 모두 400 μg/mL까지는 세포 생존율이 증가하였고 이후의 농도에서는 세포 독성을 보이는 것을 확인하였다.결론적으로, 본 실험 결과 홍삼 추출액이 면역 세포를 증식 시키는 효과를 보이나 800 μg/mL의 높은 농도에서는 독성을 나타내었다. 또한 본 연구에서 사용된 농도에서 200 μg/mL을 제외하고는 모든 농도에서 교반 추출법이 초음파 추출법에 비해 면역 세포의 증식을 높이고 이를 바탕으로 면역 기능에 도움을 줄 수 있음을 시사한다. 대식 세포에서 LPS에 의해 유도된 NO 합성 효소인 Prostaglandin-endoperoxide synthase 2 (prostaglandin G/H synthase and cyclooxygenase,cyclooxygenase-2) 혹은 COX-2의 단백질 발현에 대한 홍삼 추출물의 억제 효과를 Western blot 방법으로 조사하여 나타내었다. COX-2는 염증 발생 과정에서 arachidonic acid를 prostaglandin endoperoxide H2로 전환 시키는 효소로 염증 지표로 사용되고 있다. 그람 음성균 세포막에 존재하는 LPS는 염증 반응을 일으켜 COX-2 단백질이 발현되도록 유도하기 때문에, 본 연구에서는 홍삼 추출물로 전처리 된 Raw264.7 대식 세포를 LPS로 처리하여 염증 반응을 유도한 후 홍삼에 의한 염증 반응 억제 효과를 측정하였다. COX-2 단백질의 발현은 b–actin에 대한 %로 나타내었다. 먼저 COX-2 단백질의 발현은 LPS를 처리하지 않은 RAW264.7 세포에서는 관찰되지 않았으며, LPS 처리 후 COX-2 단백질 발현이 증가 된 것을 확인할 수 있었다. 또한 LPS에 의해 유도된 COX-2 유전자의 단백질 발현은 100 ㎍/mL 농도의 홍삼 초음파 추출물에 의해 발현이 저하되지 않았으나(11.4 %), 200 ㎍/mL 농도에서 1.4 %로 저하되었다. 초음파 추출액 100 ㎍/mL 농도에서 1.2 %, 200 ㎍/mL농도에서 1.5 % 로 낮은 농도에서도 COX-2 단백질 발현의 감소를 보였다. 그러므로 본 연구에서 홍삼의 교반 추출 액은 농도 증가에 따라 COX-2 저해 효과를 보여주었으나, 초음파 추출 방법은 농도와 관계없이 COX-2 발현을 저해하며 홍삼의 항염증 효과를 보여주었다. 기존 연구에서 RAW 264.7 세포에 LPS 단독 처리된 군에 비해 홍삼을 처리한 군에서 홍삼 농도가 증가함에 따라 유의 적으로 COX-2 발현 량이 감소함을 보고하였다. COX-2는 일반적으로 정상 세포에서는 존재하지 않는, 즉각적인 염증 초기 반응 유전자로, 염증 유발 사이토 카인을 비롯한 다양한 염증 자극에 의해 염증 부위에서 주로 유도되기도 하지만, COX-2가 염증을 유발할 뿐만 아니라 종양을 촉진한다는 많은 근거들이 제시되었다. 그러므로 COX-2는 다양한 인간 암에서 자주 과 발현되어 있고, COX-2 억제제를 항암제로 활용하고자 하는 연구들이 다양하게 존재하고 있다. 이는 홍삼 추출물이 본 연구에서 보여준 항염증 효과 뿐 아니라 추후에 항암 효과 또한 기대해 볼 수 있음을 시사한다.